一、油镜的使用方法

观察细菌时，须用放大倍数最大的物镜，即油浸镜（Oil immersion objective，简称油镜）。其原理如图一所示，当光线从标本经过空气进入镜头时，由于介质密度不同而发生光的折射（散光现象），光线不能完全进入物镜中，致使物象显现不清。若在油镜与载物玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则不使通过的光线有所损失，视野亮度增强，获得清晰物象。

(一)油浸镜的使用方法

1、双手托显微镜，轻拿轻放。

2、放好后，用绸布擦试显微镜，同时检查显微镜有无问题，有问题立即向老师报告。

3、用低倍镜调整光线，看染色标本时，要求视野达到最亮的程度。

①将集光器升到最高位置，与载物台相平。

②将虹彩完全开放。

③天然光线用平面反射镜，人工光源用凹反射镜。使视野达到最亮的程度。

4、在标本上滴一滴香柏油，不要多加。用眼睛从侧面观察，小心转动粗调节器，使油浸镜头缓慢下降，浸入油中，到几乎或轻轻与玻片接触为止。不能过急过重，以免碰坏镜片。

5、一面从目镜观察，一面用粗调节器慢慢上升油浸镜头，当见到模糊的物象时，立即停止。再用细调节器调到物像清晰为止。然后，一边移动片子，一边观察，寻找理想的视野，仔细观察。

6、看完后，先将油浸镜头上提，然后取下标本片，再用擦镜纸拭去镜头上的香柏油。必要时，用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，然后再用另一小块擦镜纸拭去二甲苯。

7、最后，降下集光器，竖起反射镜，下降镜筒使物镜成八字形抵于载物台绸布上，双手托持显微镜，放入显微镜箱中。

(二)注意事项

1、不得在直射阳光下操作显微镜，以免强光损坏镜片。

2、显微镜的细调节器是精密而脆弱的机件，只能做有限的旋转，因此，不得向一个方向连续旋转数周。当旋转时感到有阻力，则表明已达极限，不能再继续向上方旋转，必须立即退回，轻拿轻放，防止细调节器因震动而损坏。

3、显微镜必须保存于干燥、无尘的方，以防镜片发霉损坏。

二、细菌的基本形态、特殊构造的观察

细菌的基本形态（球菌、杆菌、螺形菌）和细菌的特殊构造（荚膜、鞭毛与芽胞等）都可以在染色之后，用油浸镜观察

(一)细菌的基本形态观察

注意观察细菌的形态、大小、排列和染色性。

1、球菌和杆菌（葡萄球菌和大肠杆菌）

革兰氏染色标本，葡萄球菌染成紫色，大肠杆菌染成红色。

2、弧菌（霍乱弧菌）

革兰氏染色标本，霍乱弧菌染成红色。

(二)细菌的特殊构造观察

1、荚膜（肺炎球菌）

Hiss氏荚膜染色法，菌体染成紫色，荚膜染成淡紫色或无色。

2、鞭毛（变形杆菌）

户田氏鞭毛染色法，菌体和鞭毛均染成红色。

3、芽胞（破伤风杆菌）

Moeller氏芽胞染色法，菌体染成兰色，芽胞染成红色。

三、细菌大小的测定

细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计二种，接目镜刻度是相对的，在同一接目镜下，它是随着不同放大率的接物镜而改变相对比例，而镜台测微计上所刻的长度是绝对的用来校正接目测微计每格所代表的大小。

材料：光学显微镜、接目测微计、镜台测微计。

方法：

1、将接目测微计装入接目镜内的横隔上，刻度向下，置镜台测微计于镜台上。

2、在接目镜下寻镜台测微计的刻度（这时光圈宜小，因光线暗才能使刻度更为清楚。需要用那一放大率的接物镜观察标本，则在校正接目测微计时就用那一个接物镜头。

3、移动镜台测微计和转动接目测微计使二者刻度平行，并使二者的起始线相重迭，数出二条重迭线之间在两个测微计上的格数即可求出接目测微计每格的长度。接目测微计与镜台测微计二个重迭点间的距离越长，则所得的数字越精确。

4、接目测微计每格长度的计算：

镜台测微度总长度为1毫米，其上刻有10大格，每格划有10小格，所以每小格=1/100=10μm（因为1mm=1000μm）。

例：今测得高倍显微镜（油镜）的接目测微计50格相当于镜台测微计7格，则接目测微计每格长度为：

5、校正后移去镜台测微计，将细菌玻片标本置于镜台上，找到目的物后，移动接目测微计（或移动标本），测定细菌长与宽各占儿格，求得其大小。

细菌的大小=测得之格数×接目测微计每格长度。