一、常用培养基的制备

培养基是用人方法将多种营养物质按微生物生长需要配成的一种营养基质。常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。其制备步骤大致是：按一定配方称取各种物质、溶解、修正pH，分装在一定的容器内，灭菌。使用前保证无菌状态。常用的培养基有下列几种，简介其制备方法和用途。

(一)肉汤培养基

材料：

肉膏    0.5g

蛋白胨  1.0g

Nacl    0.5g

蒸馏水  100ml

方法：

1、将上述材料混合，加热溶解，放凉。

2、用精密pH试纸试酸碱度，用10％碳酸钠（Na₂CO₃^-）或1N氢氧化钠（NaOH）矫正pH为7.2左右。过碱时可用10％醋酸或1N盐酸矫正。必要时可用比色箱或酸度计更准确地测定酸碱度。

3、分装于试管中或放三角烧瓶中，用15磅高压蒸气灭菌20-30分钟。待用。

用途：主要用于增菌和观察细菌在液体培养基中的生长状态（沉淀生长、混浊生长和表面生长）。

(二)营养琼脂培养基

材料：合成营养琼脂              4.8g（视制剂说明）

      蒸馏水                    100ml

方法：混合，加热溶解，勿需调pH。分装于试管和三角烧瓶中，一并高压灭菌。灭菌后，将试管倾斜放置，冷却后则成斜面培养基；三角烧瓶中的培养基趁热倒入灭菌平皿中，冷却后即成琼脂平板。

用途：琼脂平板用于分离细菌等；琼脂斜面用于细菌纯培养和菌种保存等。

(三)血液琼脂培养基

材料：营养琼脂培养基            100ml

      脱纤维的新鲜羊血或兔血    5-10ml

方法：将营养琼脂加热溶化（或高压灭菌后），待冷即到50℃左右时，无菌操作将羊血或兔血加入后混匀，分别注于无菌平皿或试管中，制成血平板或血斜面。

用途：供培养要求较高的细菌。

(四)半固体培养基

材料：合成半固体培养基           1.0g（视说明）

      蒸馏水                     100ml

方法：混合，加热煮沸溶解，分装于小试管中，高压灭菌后，直立，使之凝固成高层。

用途：供测定细菌的动力和保存菌种。

(五)蛋白胨水培养基

材料：蛋白胨                     1.0g

      Nacl                       0.5g

      蒸馏水                     100ml

方法：

1、按量称取后混合加热溶解。

2、矫正pH为7.2-7.6。

3、分装后高压灭菌。

用途：蛋白胨水中不含糖类，常用于制备糖发酵培养或用检查细菌的靛基质反应等。

二、常用热力灭菌器及其使用方法（示教）

高温能使微生物蛋白质凝固变性，故高温能杀灭所有的病原微生物。在医学实践中常用下述热力灭菌。

(一)干烤箱（干热灭菌器）

干烤箱是用两层金属板制成的箱子，中间充以石绵，箱底有热源（电炉），并附有温度计和自动调节器。灭菌时，打开通气口，加热到80℃时，关闭通气口，加热到160-170℃时，保持两小时，即可灭菌。最高温度不得超过180℃，超过180℃则棉塞和包装纸会被烤焦。灭菌后，待温度下降到40℃以下，再开箱取物，防止玻璃器材因骤冷而破裂。

耐高热和干烤的玻璃器材、磁器等常用此法灭菌。如培养细菌用的试管平皿、吸管等，经清洗和晾干之后，进行干热灭菌。为了使灭菌后的器材保持无菌状态，烧瓶和试管要塞上棉塞，平皿和吸管要放入特制的筒内或用纸包好再行灭菌。

(二)流通蒸汽消毒器

实验室常用的流通蒸汽消毒器，其原理和一般的蒸锅相同。消毒时，用流通蒸汽（100℃）蒸30分钟，可消毒用过的细菌培养物和病人的衣物等。100℃30分钟，不能灭尽芽胞，达不到灭菌的要求。一些不耐高热的含糖或牛奶培养基，可用流通蒸汽消毒器进行间歇灭菌，即每天100℃30分钟，连续进行三天；不加热时，把培养基放在室温中，使其中的芽胞发育成繁殖体，于次日加热时将其杀死。

(三)高压蒸汽灭菌器

高压蒸汽灭菌器是一个能密闭的耐高压的金属圆简，附有加水、贮水、排水、加热、排汽活门、安全活门和压力计等装置。小型的手提式高压蒸汽灭菌器，结构简单，使用方便。

高压蒸汽灭菌器的使用方法如下：

1、先向筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再把盖拧紧，打开排气活门，开始加热。

2、水沸腾后，排气活门开始排出气体，待筒内冷空气全部排出后，关闭排气活门。此时筒内压力逐渐上升。

3、待筒内压力达到所需磅或公斤数时，调节热源，维持一定时间，一般是15磅（温度为121.3℃）20-30分钟，即可达到灭菌的目的。

4、达到灭菌所需时间后，关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到“0”时，方可开盖取物。

使用高压灭火器灭菌，是最有效而又迅速的方法。凡不怕高热的普通培养基、药品、手术器械、外科敷料等，均可用此法灭菌。为保证灭菌效果和安全。器内要加入足量的水，装入的物品不要过挤，冷空气必须排尽，注意压力表的工作情况，防止因压力表失灵而造成事故。