一、细菌的培养法

根据培养基的物理性状（液体、固体、半固体）的不同，培养方法也不同。常用的培养方法有：平板培养法、斜面培养法、高层培养法和液体培养法。

材料：

琼脂平板、琼脂斜面、半固体高层和肉汤培养基，大肠杆菌、枯草杆菌的培养物等。

方法：

1、平板培养法（分离培养法）：临床上常用的检验标本，如粪、痰、脓汁等中常混有多种菌。欲从病人标本中检出某种病原菌时，必须先将各种菌分开，获得纯菌，然后再做进一步鉴定，这样才达到目的。琼脂平板面积大，通过一定的方法进行培养，则可达到分离各种细菌目的。平板培养法种类很多，现将三段划线法介绍如下：

①将接种环火焰灭菌后，取检查材料，反复涂于平板上端。

②将接种环火焰灭菌后，把涂于平板上端的材料，划线于“1”区。

③将接种环火焰灭菌后，把“1”区部分材料划线于“2”区。

④将接种环火焰灭菌后，把“2”区部分材料划线于“3”区。

⑤划线完了后，盖好平板，灭菌接种环。

⑥于盛琼脂的底面玻璃上注明日期和姓名，放37℃培养18-24小时。

2、斜面培养法：斜面培养基不易污染，常用于培养纯种细菌（纯培养）。

①先将接种环灭菌，然后挑取平板上弧立菌落上的细菌。

②拔去斜面培养基的棉塞，试管口经火焰灭菌，将沾有细菌的接种环伸入管内，自下而上划一直线，然后将接种环再自下而上，连续平行划线。

③接种后，管口在火焰上灭菌，塞好棉塞。

④灭菌接种。在试管上写好菌名，日期。

⑤37℃培养18-24小时。

3、液体培养法：用于增菌，并可观察细菌的生长状态和检查生化反应。

①用灭菌接种环取少许纯菌。

②按无菌操作要求，将沾有细菌的接种环伸入液体培养管中，在稍高于液面的管壁上，轻轻研磨，使细菌落入液体培养基中。

③接种后，管口在火焰上灭菌，塞好棉塞。

④灭菌接种环，在试管上做好标记。

⑤37℃培养18-24小时。

4、半固体培养法（穿刺培养法）：常用以检查细菌运动或检查细菌发酵能力。

①用灭菌接种环（白金针）取少许纯菌。

②按无菌操作要求，将沾有细菌的接种针，从半固体培养基的正中刺向管底，但不到底，

留有0.5厘米左右。然后，按原线抽出。

③④⑤同上。

二、细菌的分布

细菌种类繁多，繁殖迅速，分布广泛。不论空气、土壤、水、食物、各种物体和器械的表面，以及动物和人体与外界相通的腔道中都有细菌存在。因此，了解细菌在自然界及正常人体中的分布，对于在医疗实践与某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。

(一)空气细菌的检查

材料：普通琼脂平板。

方法：将普通琼脂平板置于室内不同地方，打开盖子，暴露于空气中5-10分钟，盖好，放37℃温箱，培养24小时。

结果：观察平板上菌落的数目。

(二)土壤中细菌的检查

材料：地表土壤，肉汤培养基。

方法：取少量土壤放入肉汤培养基内，37℃培养24小时。

结果：观察细菌生长状况。

(三)手指等的细菌检查

材料：普通琼脂平板。

方法：将手指、钱币、衣物等直接涂于琼脂平板上，注意勿将琼脂表面弄破，37℃培养24小时。

结果：观察平板上细菌生长的情况。

(四)口腔中细菌的检查

材料：血液琼脂平板。

方法：将平皿盖打开，向血液琼脂表面连续咳嗽二、三次，盖好后，37℃培养24小时。

结果：观察平板上细菌生长的情况。