一、细菌生长状态观察

细菌不同，在培养基上的生长状态也不相同。通过观察细菌生长状态，有助于鉴定细菌。

(一)琼脂平板上菌落观察

一个细菌在固体培养基上，经过一定时间的生长繁殖之后，所形成的肉眼可见的细菌集团，称为菌落。很多菌落连在一起，融成一片，称为菌苔。由于细菌种类不同，以及培养基的成分不同，形成的菌落特点也不同，可呈现一定的形态、色泽等，有助于鉴别细菌。因此，应当对菌落进行认真观察。其观察要点如下：

1、大小：以直径（毫米）表示之，1毫米左右为小菌落，2-3毫米为中等大落，3毫米以上为大菌落。

2、形状：圆形、卵园形及不规则形。

3、边缘：整齐或不整齐、锯齿状、毛发状等。

4、表面：光滑、湿润皱纹、干燥等。

5、隆起度：扁平、凸起、中心凹陷等。

6、透明度：透明、半透明、不透明。

7、颜色：无色、白色、黄色等。

8、溶血性：在血平板上产生溶血毒素的细菌，可以使培养基中的红细胞破坏溶解。可分为完全溶血，草绿色溶血及不溶血。

根据菌落的特点，可分为光滑型（S型）菌落和粗糙型（R型）菌落。S型菌落为圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润。R型菌落与之相反。

(二)斜面上生长状态观察：可见有均匀一致的菌苔，如有不同的菌落出现，则表明污染了杂菌。

(三)液体培养基中生长状态观察：未培养前的液体培养基多为清澈透明的。接种细菌培养后，由于细菌种类不同，可有以下三种生长形式：

1、混浊：液体变为混浊。

2、菌膜：液体澄清，表面有一薄膜。

3、沉淀：管底有沉淀物。

(四)半固体中生长状态观察：无鞭毛（无运动）的细菌，以培养后仅沿穿刺线生长，培养基清亮。有运动的细菌，沿穿刺线向外扩散，穿刺线模糊不清，培养基混浊。

二、细菌运动观察

应用不染色标本可观察活细菌的运动和状态，且能避免由于某些染色操作而引起的细菌变形。常用的不染色标本的制备方法有悬滴法、压滴法及暗视野显微镜检查法等。

材料：枯草杆菌和葡萄球菌混合菌液、盖玻片、凹玻片、凡士林油及暗视野显微镜。

方法：取清洁的凹玻片和盖玻片各一张。涂少许凡士林于凹玻片窝的周围；取一接种环菌液滴于盖玻片中央，将盖玻片迅速翻转，盖于凹窝上。轻压盖片，使其固定并密封，防止菌液变干，便于长时间观察。

镜检方法：将集光器稍降下，使视野内光线变暗。用低倍镜检出悬滴边缘，然后换高倍镜或油镜观察细菌的形态和运动。

枯草杆菌有鞭毛能运动，它们在运动时各向不同方向进行，速度较快，相互间的位移很大，称之为真性运动或固定运动。葡萄球菌没有鞭毛不能运动，但由于受水分子的撞击而呈分子运动（布朗氏运动），只在原地颤动，位移不大。

(二)压滴法

取混合菌液1-2滴，放于载物玻片中央，小心地把盖玻片放入液滴之上。镜检方法与悬滴方法相同。压滴法比悬滴简单，但标本容易干涸，不能作长时间观察。

(三)暗视野显微镜检查法

镜检方法

①将混合菌液直接滴于载物玻片上，加盖玻片，做成压滴标本。

②在标本未放载物台上之前，调节光源光镜，此时在暗视野集光器的面上可以看到一个光圈，用低倍接物镜来观察光圈并转动集光器上的螺旋，使光圈位于视野正中，在集光器上加镜油一滴。

③降低集光器，放标本于载物台上，徐徐升高集光器，使油滴与玻片接触，但避免油滴中有气泡产生。

④用低倍接物镜观察标本。这时可以看到一个光点，升降集光器使光点集中而且光度强烈，并使光点位于视野正中。

⑤在标本的盖玻片上加镜油，改用油浸镜观察。此时应放开接物镜上的虹彩，转动镜筒的调节螺旋，待初步看到物像的轮廓以后，再慢慢缩小接物镜上的虹彩，直至视野完全无光，而被检微生物清晰可见。

【原理】

由于活的细菌、螺旋体等体积微小而且半透明，在普通显微镜下不易看清楚，如果用暗视野显微镜，即在普通光学显微镜上安装一个特制的集光器一暗视野集光器（图2），其中央为不透明的黑板所遮，光线不能直接通向镜筒，仅可从其

四周边缘斜射到载玻片标本上。因光线不直接上升，所以视野背景是暗的。从集光器斜射到细菌等微粒上的光线，由于散射作用而发出亮光，反射到接物镜内。故在强光照射下，可以在黑色的视野中看到发亮的菌体。犹如黑夜的天空，闪烁着点点星光；也正象我们在暗室内，能看见从隙缝漏入的阳光内，有千万颗尘埃微粒跳跃飞舞其中一样。